Реакции Бласттрансформации Лимфоцитов Методика
Величины стимулированной реакции бластной трансформации лимфоцитов у взрослых в норме: с ФГА - 44-72%, с КонА - 40-75%. О функциональной активности Т- и В-лимфоцитов судят по реакции бластной трансформации лимфоцитов с использованием митогенов - ФГА, КонА, латекса, липополисахаридов и др.. Пролиферативный ответ лимфоцитов на антигены даёт представление о выраженности специфической сенсибилизации организма. Состояния и заболевания, приводящие к её изменению, аналогичны изменениям бластной трансформации лимфоцитов без стимуляции. Тест применяют для комплексной оценки иммунного статуса больного. Медицинский эксперт-редактор.
Центральные связаны с непосредственным влиянием на функцию иммунных клеток: 1) клональное абортирование 2) клональная делеция – элиминация антигеном имм. Клеток в тимусе (вероятно, апоптоз незрелых Т-лимфоцитов наступает вследствие воздействия на них Аг без сопутствующих сигналов – интерлейкина Iи интерлейкинаII), а также клеток В-зависимой популяции 3) повышение активности супрессорных Т-клеток 4) блокада эффекторных клеток (напр., блокада синтеза В-клеткой антител вследствие связывания её антигенных рецепторов поливалентным антигеном 5) блокада, опосредованная введенными антителами – искусственно введенные АТ быстро элиминируют Аг и имм.ответ на развивается. 6) отсутствие контрсупрессии Т-хелперы не активируются Б. Периферическиене связаны с изменением функции иммунокомпетентных клеток. Обуславливают в некоторых системах состояние видимой ареактивности: 'перегрузка антигеном', сывороточные антитела 34.
Клеточные факторы иммунитета для оценки иммунного статуса организма (Е-РОК, РБТЛ, РТМЛ ). Метод е-рок (е-розеткообразующих клеток) Этот метод – общепризнанный стандартый метод колич. Учета Т-лимфоцитов в периферической крови людей. При смешивании лимфоцитов чка и эритроцитов Баранова последние избирательно адсорируются только Т-лимфоцитами и образуют т.н.
Розеткообразующей клеткой (РОК) считается лимфоцит, присоединивший 3 и более эритроцитов Баранова. Исходя из абсолютного кол-ва лейкоцитов в 1 л крови вычисляют абсолютное кол-во Т-лимфоцитов в 1 л крови. У здоровых людей Т-лимфоциты составляют 40-70% общего числа лимфоцитов. Рбтл (реакция бласттрансформации лимфоцитов Основан на наличии митогенов, специфически действующих на Т- или на В-лимфоциты, что позволяет раздельно судить о функциональной активности Т- и В-клеток. (Так, ФГА и конканавалин А стимулируют Т-кл., а митоген Лапокосса и ЛПС эшеришии (E.coli) – В-клетки. Схема постановки реакции: 1) выделение лимфоцитов 2) подсчет кол-ва клеток и доведение суспензии до нужной концентрации 3) посев клеток и их последующее культивирование в течение 72 часов 4) регистрация результатов, включая: а) приготовление мазков для подсчета процента стимулированных лимфоцитов б) определение интенсивности включения Н-3-тимидина ( 3Н) Ртмл (реакция торможения миграции лейкоцитов) Используется для изучения акитвности лимфокининов.
В основе РТМЛ лежит способность гранулоцитов и моноцитов крови, а также макрофагов к свободной миграции, которая тормозится под действием лимфокина. Миграцию и ее торможение под влиянием лимфокинов изучают в специальных капиллярах или на стекле под слоем агарозы. Результаты ингибиции миграции оценивают по разности площадей миграции клеток. Оценка гуморального иммунитета (В-системы) включает определение кол-ва В-лимфоцитов в крови с помощью теста розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами, несущими на своей поверхности комплекс (антиэритроцитарные АТ + комплемент), с целью выявления на лимфоцитах рецепторов для комплемента и теста иммунофлюоресценции с использованием антисывороток против иммуноглобулинов чка. Функциональную активность В-лимфоцитов оценивают косвенно по уровню сывороточных иммуноглобулинов различных классов – IgG,IgM,IgA,IgE. Свойства, структура, роль в организме, механизмы активации.
СИСТЕМА КОМПЛЕМЕНТА – многокомпонентная самособирающуюся систему белков сыворотки крови, к/я играет важную роль в поддержании гомеостаза. Активируется в процессе самосборки, т.е. Последовательного присоединения к образующемуся комплексу отдельных фракций (их 9). Продуцируются онипечени, мононуклеарными фагоцитами и содержатся в сыворотке крови в неактивном состоянии. Процесс активации комплемента инициируется 2 путями: Классический путь (1-4-2-3-5-6). Инициирующим фактором является иммунный комплекс Аг-Ат, причем только содержащие Fc-фрагменты – IgG и IgM могут связывать С1-фракцию комплемента.
При присоединении С1 к иммунному комплексу образуется Cl-эстераза → формируется энзиматически активный комплекс (С4b+С2а) – С3-конвертазой. Этот фермент расщепляет С3 на С3а и С3b. При взаимодействии субфракции С3b с С4 и С2 образуется пептидаза, действующая на С5. Если инициирующий иммунный комплекс связан смембраной, то самособирающийся комплекс С1-4-2-3 обеспечивает фиксацию активированной фракции С5, а затем С6 и С7. Последние три компонента фиксируют С8 и С9. При этом С5а+С6+С7+С8+С9= мембраноатакующий комплекс, после его присоединениялизируется (гемолиз эритроцитов или бактериолизис). Особенность альтернативного пути (D-B (P))в том, что инициация может происходить без участия иммунного комплекса за счет ЛПСстенки гр–, поверхностных структур вирусов, иммунных комплексов, включающих IgA и IgE.
В этом случае необходимо участие сывороточного белка (пропердин), который активен лишь в присутствии ионов Mg 2+и факторов В и D. Фактор Dв активной форме – протеиназа, расщепляет фактор В с образованием фрагмента Вb, к/й в комплексе с С3b является С3-конвертазой. Функция пропердина– стабилизация комплекса С3b-Вb.
При активации комплемента появляются продукты протеолиза компонентов С4, С2, С3 и С5. Одни из них (фрагменты С4b, С2b, С3b, С5b) участвуют непосредственно в самосборке и активации системы комплемента. В отличие от них низкомолекулярные фрагменты С3а и С5а (АНАФИЛАТОКСИНЫ) играют роль в патогенезе болезней иммунных комплексов и других заболеваний, при которых резко ↑ связывание и активация комплемента в . Комплемент выполняет ряд функций: цитолитическое и цитотоксическое действие клетки-«мишени»; анафилотоксины участвуют в иммунопатологических реакциях; ↑ эффективность фагоцитоза иммунных комплексов (через Fc-рецепторы); фрагмент С3b способствует связыванию и захвату иммунных комплексов фагоцитами, опсонизируя объекты фагоцитоза; фрагменты С3b, С5а и Вb (хемоаттрактанты), участвуют в развитии воспаления. В здоровом организме идет постоянное формирование иммунных комплексов (против Аг аутофлоры) белки комплемента быстро обновляются.
Потребление комплемента резко ↑ при патологиях, связанных с усиленным образованием иммунных комплексов при инфекциях и иммунопатологических состояниях. Радиоиммунный анализ. Сходен с ИФА, но вместо фермента на иммуноглобулине фиксируется радиоактивная метка (напр., в состав Igвключается атом трития - 3Н). После обработки препарата раствором таких иммуноглобулинов радиоактивное излучение регистрируется (с помощью микродатчиков либо методо сцинтилляций в геле, либо др.
Метод очень чувствителен и относительно легко выполним. Кооперация клеток в иммунном ответе. Процессинг антигенов макрофагами и В-лимфоцитами.
Патрульные макрофаги, обнаружив в крови чужеродные белки (клетку), предъявляют его Т-хелперам (происходит процессингАГ макрофагами). Т-хелперы передают АГ информацию на В-лимфоциты, которые начинают бласттрансформироваться и пролиферировать, выделять нужный иммуноглобулин. Меньшая часть Т-хелперов (индукторы) побуждают макрофагов и макрофаги начинают продуцировать интерлейкин I– активатор основной части Т-хелперов. Те, возбуждаясь, в свою очередь объявляют всеобщую мобилизацию, начиная бурно выделять интерлейкин II (лимфокин), который ускоряет пролиферацию и Т-хелперов, и Т-киллеров. Последние имеют специальный рецептор именно к тем белковым детерминантам, которые были предъявлены патрульными макрофагами. Т-киллеры устремляются к клеткам-мишеням и разрушают их. Одновременно интерлейкин IIспособствует росту и созреванию В-лимфоцитов, которые превращаются в плазматические клетки.
Тот же интерлейкинIIвдохнет жизнь в Т-супрессоры, которые замыкают общую реакцию иммунного ответа, останавливая синтез лимфокинов. Размножение иммунных клеток прекращается, но остаются лимфоциты памяти.
Реакция непрямой гемагглютинации и реакция коагглютинации, механизм, практическое использование. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).Ставится для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий, микоплазм, риккетсий и вирусов, иммунные комплексы которых с агглютининами в обычных классических РА увидеть не удается, или же для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперсным веществам и мельчайшим микроорганизмам. РНГА для серодиагностики инфекционных болезней.Используя РНГА для обнаружения антител в сыворотках больных, готовят ЭРИТРОЦИТАРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ ДИАГНОСТИКУМЫ. Для этого эритроциты обрабатывают 15 мин раствором танина в разведении 1:20 000–1:200 000, что придает им устойчивость и повышает адсорбционную способность.
Реакция Бласттрансформации Лимфоцитов Методика
Затем их смешивают с известным антигеном и инкубируют в течение 2 ч при температуре 37С. Сенсибилизированные антигеном эритроциты 2–3 раза отмывают изотоническим раствором натрия хлорида и добавляют к сыворотке, разведенной и разлитой в лунки панелей.
Контролем служат взвеси интактных и нагруженных антигеном эритроцитов, которые вносят в сыворотки, дающие заведомо положительную и отрицательную реакции. Результаты реакции учитывают через 2 ч после инкубации в термостате и оценивают плюсами: «» – эритроциты покрывают лунку в виде зонтика с неровными краями; «–» – скопление эритроцитов в виде «пуговицы» РЕАКЦИЯ КОАГГЛЮТИНАЦИИ Используется для серотипирования моргов и для обнаружения АГ в биологических жидкостях. Принцип реакции.Используется способность клетокS.aureusнеспецифически фиксировать на своей поверхности иммуноглобулинFC-фрагментом благодаря наличию особого белка А. Таким путем получают стафилококковый антительный диагностикум. Реакция ставится как обычная р-ция агглютинации на среде.